微生物限度检查—制药厂用水整体解决方案_行业资讯

微生物限度检查—制药厂用水整体解决方案

时间：2024/6/26 17:37:59 点击：次

1、实验准备

开放式无菌检查薄膜过滤器、层流洁净工作台、生物安全柜、生化培养箱、全自动细菌鉴定系统

标准菌株：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉。

55批制药用水：4批注射用水、51批纯化水

营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基和0.9%无菌氯化钠溶液。

2、菌液制备

将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和枯草芽孢杆菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基 10ml中，33℃培养24h；将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基10 ml中，25℃培养24 h。上述培养物用 0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为 50～100 CFU/ml的菌悬液。

将黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，25℃培养 7d，加入 0.9％无菌氯化钠溶液(含0.05％Tween-80)3 ml，洗脱孢子。过滤菌丝，吸出孢子悬液至无菌试管内，用 0.9％无菌氯化钠溶液 (含0.05％Tween-80) 制成含孢子数50～100CFU/ml的孢子悬液。

3、培养基的适用性检查

参考 ChP 2010 中计数培养基的实用性检查方法，分别按4中两种方法培养并计数。结果如下：

4、采用USP37收载的纯化水、注射用水的微生物检验方法进行检验

USP 37对制药用水的微生物检验方法并未做明确规定，它推荐使用平板计数培养基或TGYA 培养基，于30～35℃培养48～72h，但也明确提到可以选择其他培养基、培养温度和培养时间，如低营养水平的 R2A 琼脂培养基，于20～25℃培养5～7d。因此，本研究采用平板计数培养基，30～35℃培养48～72 h；同时使用 R2A 琼脂培养基，20～25℃培养 5～7 d；两者合并计数。

用该培养基在低温长时间培养的条件下，能够修复被氯消毒过的细菌。而一些营养丰富的培养基，如胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA培养基)，往往抑制这些生长缓慢的细菌。

采用ChP2010收载的纯化水、注射用水的微生物检验方法进行检验

推荐使用营养琼脂培养基，30～35℃培养48 h；以及玫瑰红钠培养基，23～28℃培养5d；两者合并计数。采用ChP2010收载方法学验证菌株，进行培养基适用性检查，并将5株标准菌株加至营养琼脂。

5、制药用水检测结果

6、菌种鉴定

从25批制药用水中共分离出 23 株细菌，经 16S rDNA 测序方法鉴定，分属甲基杆菌属、志贺菌、施氏假单胞菌、玫瑰色库克菌、里拉微球菌、科氏葡萄球菌科氏亚种、沃氏葡萄球菌、少动鞘氨醇单菌、木糖氧化无色杆菌、人葡萄球菌、藤黄微球菌、嗜麦芽糖寡养单胞菌、脂环酸芽孢杆菌、孔氏创伤球菌、变异库克菌、鼻疽假单胞菌、克氏微球菌、放射根瘤菌、表皮葡萄球菌、洋葱伯克霍尔德菌、贪铜菌属、栖稻假单胞菌和香味菌。

3、讨论

由于细菌在 R2A 琼脂培养基上(25℃)生长速度缓慢，形成的菌落较小，培养 48h 内不易计数，据此延长培养时间至5d，可准确计数。配合平板计数培养基 35℃培养，可以对制药用水的微生物污染状况有更全面的评价。本研究结果表明，联合使用平板计数培养基和 R2A 琼脂培养基对制药用水进行微生物检验更科学、合理。