ELISA试剂盒—华安麦科试剂盒（96孔板）_超值低价

一、概要

 黄曲霉毒素(AfLatoxin)是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些和人类血液、动物饲料相关的产品中。其中黄曲霉毒素B1（AFB1）的毒性、致癌性、污染频率均居于首位。薄层色谱一直是检测黄曲霉毒素常用的方法，但是此方法制备样品及分析样品时费时又费力。而使用黄曲霉毒素B1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样本中黄曲霉毒素B1残留。

 本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等优点，操作时间仅需20min，能最大限度地减少操作误差和工作强度。

二、实验原理

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被黄曲霉毒素B1抗原，样本中黄曲霉毒素B1和此抗原竞争黄曲霉毒素B1抗体（抗试剂），同时黄曲霉毒素B1抗体与酶标二抗（酶标物）相结合，经TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素B1成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中黄曲霉毒素B1的含量。

三、适用范围

可定性、定量检测饲料及饲料原料样本中黄曲霉毒素B1的含量。

四、交叉反应率

AFB1………………………………………………...100%

AFB2………………………………………………….38%

AFG1………………………………………………….27%

AFG2…………………………………………………...4%

AFM1…………………………………………………20%

AFM2…………………………………………………<1%

五、使用单位需自备的设备及试剂

设备：

┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm

┅┅振荡器

┅┅恒温培养箱（室温能达到25℃可不选）

┅┅离心机（或者选用定量滤纸、漏斗）

┅┅天平：感量0.01g

┅┅移液管：50mL

┅┅具塞三角瓶：100mL 

┅┅带塞离心管：7mL 

┅┅微量移液器：单道 10μL~100μL、100μL~1000μL、

多道 30μL~300μL

试剂：

----去离子水

----甲醇（分析纯）

六、提供的材料与试剂

*注：稀释后标准品浓度为：0µg/kg,2.5µg/kg,7.5µg/kg,22.5µg/kg,75µg/kg.（注意：样本在提取过程中1 : 25倍稀释，标准品实际浓度为设定标准浓度的1/25，因此原样本的浓度无需校正）。

七、溶液的配制

配液1:  60%甲醇

用去离子水将甲醇按3 : 2体积比进行稀释，即3份甲醇加2份去离子水。

配液2: 洗涤液

用去离子水将浓缩洗涤液（10×）按1 : 9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10×）加9份去离子水。用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。

八、样本前处理步骤

   样本处理前须知

   处理任何样本时，都必须注意：

(a) 实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时需更换 

   吸头。

(b) 实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实 

   验器具，以避免污染干扰实验结果。

(c) 处理好的样本应立即用于检测。

饲料原料及饲料样本处理方法

----粉碎并称取5.0g有代表性的样本置入100mL具塞三角瓶中，加入60%甲醇25mL与其混合；

----于振荡器上剧烈振荡10min，转速为150r/min；(手摇或者涡旋均需5min以上)；

----取液体于4000r/min离心5min(或静置3min，再用定量滤纸过滤)；

----取上清或滤液1mL，再加入4mL去离子水（稀释后的液体PH值应保证在6~8之间，可用1M“NaOH”或“HCl”进行调节）：

----振荡5S或手摇匀, 取50μL进行分析。

含量超出检测上限的样本测定及计算方法详见：结果判定

 稀释倍数：1倍

九、操作步骤：

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20~25℃）平衡1h以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8℃。切勿冷冻。

3、洗涤液在使用前也需回温。

4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置（在一次实验过程中，标准品和样本的总量不能超过24个，即不能超过6个检测条）。

5、加标准品/样本：加入标准品或样本50μL到对应的微孔中，加酶标物50μL /孔，再加入抗试剂50μL /孔（加抗试剂时请使用多道移液器），轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15min。

6、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液300μL /孔，充分洗涤4次，每次间隔10s，在吸水纸上拍干。

7、显色：加入底物液100μL /孔（加底物液时请使用多道移液器），用盖板膜盖板后置25℃避光环境反应5min。

8、测定：加入终止液50μL /孔（加终止液时请使用多道移液器），轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，请在5min内读完数据），测定每孔OD值。(若无酶标仪，则不加终止液用目测法可进行判定)。

十、结果判定

结果判定有如下两种方法，注意样本吸光度值与其所含黄曲霉毒素成负相关。

1、定性分析

   用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(µg/kg)。假设样本1的吸光度值为0.659，样本2的吸光度值为1.525，标准液吸光度值分别是：0µg/kg为1.962；2.5µg/kg为1.609；7.5µg/kg为1.137；22.5µg/kg为0.571；75µg/kg为0.197。则样本1的浓度范围是7.5µg/kg～22.5µg/kg；样本2的浓度范围是2.5µg/kg～7.5µg/kg 。

2、定量分析

（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值（双孔以上）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，即

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值

B0—0(µg/kg)标准溶液的平均吸光度值

（2）标准曲线的绘制与计算

    以标准品百分吸光率为纵坐标，以黄曲霉毒素B1标准品浓度（µg/kg）的对数为横坐标，在半对数坐标纸上绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度。

    若样本中目标检测物浓度高于试剂盒的检测上限（75µg/kg），应将上清液或滤液先用60%甲醇适当稀释后,再按照1：4（上清/滤液：水）的比例释后进行检测，结果计算时应考虑额外的稀释倍数。

    若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。（欢迎来电索取）

十一、试剂盒参数

试剂盒灵敏度：0.1µg/kg

样本最低检测限：

饲料原料及饲料成品…………………………………2.5µg/kg

回收率

饲料原料及饲料成品………………………………… 90±15%

精密度：试剂盒的变异系数均小于10%

十二、注意事项

1、试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、每加一种试剂前需将其摇匀。

4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6、储存条件

  保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

7、试剂变质的迹象

发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

8浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。

9、该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

十三、贮藏条件及保存期

     贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃。

保存期：该产品有效期为12个月。

十四、本公司其他相关产品